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    馬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒的操作分這十一步進行

    發布時間: 2021-12-23  點擊次數: 369次
      馬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平。用純化的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入主要組織相容性復合體(MHC/BoLA),再與HRP標記的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)抗體結合,形成抗體抗原酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)濃度。

     

    馬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
     

     

      馬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒的操作分這十一步進行:
      1、標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30IU/L,20IU/L,10IU/L,5IU/L,2.5IU/L)。
      2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      4、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
      5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
      6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
      7、溫育:操作同3。
      8、洗滌:操作同5。
      9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
      10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
      11、測定:馬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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